Development of agar diffusion method for dosage of gramicidin / Desenvolvimento do método de difusão em agar para dosagem de gramicidina

Gramicidin, an antimicrobial peptide active against Gram positive bacteria, is commonly used in pharmaceutical preparations for topical use. Considering that only the turbidimetric method has been described in the literature, the present study sought to develop and validate an agar diffusion method for the dosage of gramicidin. The method was developed and validated using the Kocuria rhizophila ATCC 9341 as a test microorganism. Two designs were used: a 3x3 parallel-line model, and a 5x1 standard curve. The validation demonstrated that the method follows the linear model (r²= 0.994), presenting a significant regression between the zone diameter of growth inhibition and the logarithm of the concentration within the range of 5 to 25.3 µg/mL. The results obtained for both designs were precise, having a relative standard deviation (R.S.D.) for intra-day precision of 0.81 for the 3x3 assay and 1.90 for the 5x1 assay. For the inter-day precision, the R.S.D. was 1.35 for the 3x3 and 2.64 for the 5x1. The accuracy was verified and results confirmed to be accurate, having a tolerance interval of 95 percent, which lay within permitted limits and appropriate trueness. In addition, the method was considered selective, with limit of detection and upper and lower limits of quantification of 2.00, 5.00 and 25.3 µg/mL, respectively. No difference in precision between the designs used in the agar diffusion method was evident (p>0.05). The method proved to be appropriate for the microbiological dosage of the raw material gramicidin.

A gramicidina, um peptídeo antimicrobiano ativo contra bactérias Gram positivo, é utilizada em preparações farmacêuticas de uso tópico. Neste trabalho procurou-se desenvolver e validar outro método para o doseamento de gramicidina tendo em vista que somente o método turbidimétrico é descrito. O método de difusão em ágar foi desenvolvido e validado utilizando como microrganismo teste Kocuria rhizophila ATCC 9341. Foram utilizados dois delineamentos: retas paralelas 3x3 e curva padrão 5x1. A validação demonstrou que o método segue o modelo linear (r²= 0,994) havendo regressão significativa entre o diâmetro dos halos de inibição e o logaritmo da concentração na faixa de 5,00 a 25,3 µg/mL. Os resultados obtidos por ambos os delineamentos foram precisos apresentando desvio padrão relativo (DPR) para precisão intra-dia de 0,81 para ensaio 3x3 e de 1,90 para ensaio 5x1. Para a precisão inter-dias o DPR foi de 1,35 para 3x3 e de 2,64 para 5x1. A exatidão foi verificada e os resultados foram exatos apresentando intervalo de tolerância a 95 por cento dentro dos limites permitidos e veracidade adequada. O método foi seletivo com limites de detecção e quantificação inferior e superior iguais a 2,00, 5,00 e 25,3 µg/mL, respectivamente. Não foi observada diferença entre a precisão dos delineamentos empregados no método de difusão em ágar (p>0.05). O método se mostrou adequado para a dosagem microbiológica de gramicidina matéria-prima.

Atividade antimicrobiana in vitro do rizoma em pó, dos pigmentos curcuminóides e dos óleos e dos essenciais da Curcuma longa L. / In vitro antimicrobial activity of the ground rhizome, curcuminoid pigments and essential oil of Curcuma longa L.

Este trabalho teve como objetivo avaliar a atividade antimicrobiana da cúrcuma em pó, da curcumina disponível no comércio, dos pigmentos curcuminóides purificados e dos óleos essenciais da cúrcuma. As amostras foram analisadas quanto aos teores de pigmentos curcuminóides por cromatografia líquida de alta eficiência. O óleo essencial foi também analisado quanto à densidade, índice de refração e perfil das substâncias voláteis por cromatografia gasosa e detector de ionização de chamas. A atividade antimicrobiana in vitro foi determinada pelo método de difusão em ágar com discos de papel estéreis, impregnados com os extratos, sendo os diâmetros dos halos de inibição medidos com paquímetro. Os extratos etanólicos da cúrcuma, da curcumina comercial, e dos pigmentos curcumina e desmetoxicurcumina não inibiram o crescimento de Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Salmonella choleraesuis, Escherichia coli, Aspergillus niger, Saccharomyces cerevisiae, e Candida albicans. Apenas o extrato etanólico da bisdesmetoxicurcumina apresentou atividade antimicrobiana em relação ao B. subtilis. O óleo essencial da cúrcuma apresentou atividade antimicrobiana para o B. subtilis, S. choleraesuis, E. coli, A. niger e S. cerevisiae, sendo que essa atividade aumentou em função do aumento da concentração. Os halos de inibição, obtidos com o óleo essencial, foram significativos, quando comparados aos respectivos antibióticos tradicionais, cloranfenicol e anfotericina, indicando ser o óleo essencial da cúrcuma um agente antimicrobiano em potencial.

The objective of this work was to investigate the antimicrobial activity of ground turmeric, commercially available curcumin, purified curcuminoid pigments and turmeric essential oils. The samples were analyzed for the levels of curcuminoid pigments by high performance liquid chromatography. The essential oil was also analyzed for density, refractive index and profile of volatile compounds by gas chromatography-flame ionization detection. The in vitro antimicrobial activity was determined by the agar diffusion method using sterile disks impregnated with the extracts and the diameters of the inhibition zones were measured using a caliper. The ethanolic extracts of turmeric, commercial curcumin, and the purified pigments curcumin and demethoxycurcumin did not inhibit the growth of Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Salmonella choleraesuis, Escherichia coli, Aspergillus niger, Saccharomyces cerevisiae, and Candida albicans. Only the ethanolic extract of bisdemethoxycurcumin showed in vitro antimicrobial activity on B. subtilis. The essential oil of turmeric inhibited the growth of B. subtilis, S. choleraesuis, E. coli, A. niger and S. cerevisiae. The antimicrobial activity increased with an increase in the concentration of the essential oil. The inhibitory effects on the microorganisms were significant when compared to the respective traditional antibiotics chloranphenicol and anphotericin. This result indicates that the essential oil from turmeric is a potential antimicrobial agent.

Comparison of the estrogenic potencies of standardized soy extracts by immature rat uterotrophic bioassay.

Soy phytoestrogens, isoflavones, are a primary class of plant-based estrogen alternatives being sold over the counter nowadays. Genistein, daidzein and glycitein are the major isoflavones found in soybeans, as aglycones and glycosides. Each isoflavone shows distinctive estrogenic activity and pharmacokinetics. Soy dry extracts, employed as pharmaceutical raw material for manufacturing isoflavone supplements, are standardized to contain 40% of total isoflavones, but the amount of each isoflavone is highly diverse. The influence of these compositional differences on the estrogenic potency of soy extracts was evaluated by uterotrophic bioassay. Five commercial samples of standardized soy dry extract, homogeneously suspended in arachis oil, were administered per os in serial doses (125-4150 mg/kg bw/day) to immature female rats for 3 days. Soy extract samples with considerable diversity in isoflavone composition revealed different estrogenic potencies. Our results indicate a need of standardization of the individual isoflavone content in soy extracts.

Determinação de daidzeína, genisteína e gliciteína em cápsulas de isoflavonas por cromatografia em camada delgada (CCD) e cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) / Determination of daidzein, genistein and glycitein in isoflavone capsules by thin layer chromatography (TLC) and high performance liquid chromatography (HPLC)

A utilização de produtos naturais e suplementos contendo extratos secos de isoflavonas aumentou na última década, devido, principalmente, aos efeitos benéficos atribuídos a estes compostos no alívio dos sintomas da menopausa. Genisteína, daidzeína e gliciteína são as agliconas mais abundantes nos extratos de soja, ocorrendo também como glicosídeos. Tendo em vista seus usos, não existe ainda na literatura uma definição da quantidade mínima de cada uma das agliconas que os extratos ou cápsulas de isoflavonas devem ter, e também não existe um método oficial para o controle de qualidade dos mesmos. O presente trabalho apresenta um método por CCD para análise qualitativa das três agliconas e de seus glicosídeos em extratos e cápsulas de isoflavonas, antes e após hidrólise ácida. A análise quantitativa das cápsulas de isoflavonas, realizada por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), revelou grandes variações nos teores das três agliconas, após hidrólise ácida. Os teores variaram da seguinte forma, nos 18 lotes de cápsulas avaliados: daidzeína (13,34 a 76,20 mg/cápsula), genisteína (0,61 a 27,18 mg/cápsula) e gliciteína (0,49 a 8,80 mg/cápsula).

The use of herbal products and supplements based on isoflavone dry extracts has increased considerably in the last decade, mainly due to beneficial effects to relief of the menopausal symptoms credited to those compounds. Genistein, daidzein and glycitein are the most abundant isoflavone aglycones found in soy extract, where they also occur as glycosides. Concerning their uses, there is neither standardization regarding the minimum content of each aglycone in the extracts or capsules, nor an official method to the quality control of these products. The present work presents a TLC method for qualitative analysis of the three aglycones and their glycosides in extracts and capsules of isoflavones, before and after acid hydrolysis. The quantitative analysis of the isoflavone capsules, carried out by high performance liquid chromatography (HPLC), showed high variation in the content of the three aglycones, after acid hydrolysis. The contents varied in the following way, in the 18 batches of evaluated capsules: daidzein (13.34 to 76.20 mg/capsule), genistein (0.61 to 27.18 mg/capsule) and glycitein (0.49 to 8.80 mg/capsule).

Investigation of fatty acid esters to replace isopropyl myristate in the sterility test for ophthalmic ointments.

Several pharmacopoeias recommend the membrane filtration method for the sterility test of ophthalmic ointments. Isopropyl myristate, a fatty acid ester that exhibits high toxicity mainly against Gram-negative microorganisms, is indicated as a solvent for ointments. In this study, six fatty acid esters (diethyl adipate, diisopropyl adipate, ethyl laurate, ethyl myristate, methyl caprylate and isopropyl palmitate) were evaluated as solvents to replace isopropyl myristate in the sterility test for ophthalmic ointments. The logarithm of the partition coefficient (logP) of the fatty acid esters was calculated from the sum of the substituent hydrophobicity constants (pi) of the functional groups present in their molecules. The ability of the solvents to dissolve an ophthalmic ointment base was investigated. The D-value method was used to assess the antimicrobial activity of isopropyl palmitate, ethyl myristate, ethyl laurate and isopropyl myristate against Pseudomonas aeruginosa. Isopropyl palmitate was the least toxic solvent to this microorganism, since it had the highest D-value (171.1 min). No significant difference was observed between the D-values of ethyl myristate (89.4 min) and isopropyl myristate (92.5 min). Ethyl laurate exhibited the lowest D-value (27.2 min). Using gas chromatography coupled to mass spectrometry, other fatty acid esters were detected as the predominant impurities in the solvents, as well as acid contaminants in low or insignificant amounts.

Development and validation of a RP-HPLC method for quantification of isoflavone aglycones in hydrolyzed soy dry extracts.

Isoflavones are widely used as an alternative treatment to hormone replacement therapy and also for prevention of several chronic diseases, including cancers. Genistein, daidzein and glycitein are the most abundant isoflavone aglycones found in soy extracts, where they also occur as glycosides. This paper describes the development and validation of an isocratic reversed-phase HPLC (RP-HPLC) method for the analysis of isoflavone aglycones, released after acid hydrolysis of soy dry extracts, used as pharmaceutical raw material. The quantification was carried out in a C(18) endcapped column, using a mobile phase composed of 0.1% acetic acid and methanol (52:48), at a flow rate of 1.0 ml/min and diode array detection (DAD) at 254 nm. The method showed to be linear (r(2)>0.99), precise (R.S.D.<2%), accurate (recovery of 98.88% for daidzein and 98.12% for genistein), robust and specific.

Influence of the formulation type (o/w, w/o/w emulsions and ointment) on the topical delivery of paromomycin

Ointments containing paromomycin (PA) have been used for topical treatment of cutaneous leishmaniasis. Although influence of the vehicle on skin permeation is crucial for optimization of formulations containing PA, this aspect has not been investigated experimentally. In this study, we have evaluated the influence of the formulation type [oil-in-water (o/w), water-in-oil-in-water (w/o/w) emulsions and ointment] on in vitro release and skin permeation of PA and experiments were carried out on cellulose acetate membrane and skin biopsies from hairless mice, respectively. PA release from o/w emulsion (51.7 por cento ± 0.9 of dose applied) was faster than that observed for w/o/w emulsion (3.0 por cento ± 0.5)...

Avaliaçäo da qualidade de cápsulas de tetraciclina disponíveis no comércio / Evaluation of quality of tetracycline capsules available in the drug market

A qualidade de cápsulas de 250mg de tetraciclina, comercializadas em farmácias e drogarias de Belo Horizonte foi avaliada. Determinou-se o teor de tetraciclina e a atividade antimicrobiana em seis especialidades de laboratórios distintos, sendo quatro fabricados por laboratórios nacionais, um por laboratório multinacional e outro por laboratório estatal e distribuído através do Programa de Assistência Farmacêutica do Governo Federal. Para determinaçäo do teor, utilizou-se a espectrofotometria no visível, após reaçäo com o ion férrico; e, para a determinaçäo da atividade, o método turbidimétrico. Três dos seis produtos se apresentaram com teor e atividade abaixo dos limites específicos, e um outro, apesar do teor dentro do especificado, apresentou atividade baixa. Tendo em vista os resultados obtidos se faz necessária uma reflexäo sobre o papel dos orgäos de vigilância sanitária no que diz respeito à comercializaçäo de medicamentos no país.

Os (des)caminhos do ensino de Farmácia no Brasil / The out of way Pharmacy teaching in Brazil

Neste artigo discute-se a questäo do ensino e da profissäo farmacêutica no Brasil, a partir de uma perspectiva histórica. Busca-se estabelecer a relaçäo entre as mudanças introduzidas nos cursos de farmácia e o mercado de trabalho da profissäo no contexto mais amplo da industrializaçäo brasileira e, em especial, do setor farmacêutico.

Estudo da atividade antimicrobiana de extrato de folha de Aristolochia gigantea Mart e Zucc / Study of the antimycrobial activity of extracts from the leaves of Aristolochia gigantea Mart and Zucc

Foram investigadas as atividades antibacteriana e antifúngica dos extratos éter de petróleo e alcaloídico de folhas de Aristolochia gigantea Mart e Zucc, pelo método de difusäo em agar. O extrato éter de petróleo mostrou atividade contra uma bactéria Gram-positiva. O extrato alcaloídico apresentou atividade contra duas bactérias Gram-positivas. Uma Gram-negativa, näo apresentando qualquer atividade antifúngica.

Estudo da atividade antibacteriana de extratos de espécies de aristolochiaceas brasileiras / Study of the antibacterial activity of extracts from Brazilian Aristolochiaceae especies

Foram testadas as atividades antibacterianas de extratos de folhas, flores, caule e raizes de Aristolochia gigantea Mart e Zucc e de Aristolochia glandulosa Ferrari, frente a bactérias Gram-positivas e Gram-negativas, pelo método de difusäo em placa. Cinco extratos mostraram-se ativos.